Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒 (U型板4-16%预制胶，通用型)    Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit   货号 名称 包装 RTD6139-0416 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒 (U型板4-16%预制胶，通用型) 10 次
货品内容： 组份 货号 名称 规格 保存 1 RTD6138-0416 4-16% RealPAGE Native BN/CN 预制胶(12 孔) (U型板，通用型) 10板 4℃ 2 BC500P 10×BN/CN PAGE电泳缓冲液（干粉） 500 ml RT 3 PL114 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 1 ml -20℃ 4 BC250 0.4% G-250染料（电泳用） 100 ml 4℃ 5 BC260 5% G-250染料（上样用） 1 ml 4℃ 6 说明书 一份
产品简介： Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中分离分子量10 kD-10 M kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM，digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷，根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是电泳缓冲液中不加入任何染料，电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在，使蛋白都覆盖上负电荷，可以分离碱性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只适合于酸性蛋白（pI＜7）的分离。 本产品包括BN/CN-PAGE制胶的所有成分，方便使用。可以用于分离分子量在 10 kD-10M kD 的蛋白复合体，样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验，也可直接用于电洗脱制备蛋白。
运输和贮存： 本产品常温运输；组份按照标签温度贮存；有效期一年。
使用说明： 1. 样品制备：    该试剂盒不含样品制备的相关试剂，样品具体制备方法参考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006. 2. 电泳： 2.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。 注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。 六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。 不兼容Thermol系列电泳槽。 2.2 准备电泳缓冲液： 将10×BN/CNPAGE电泳缓冲液（干粉）溶于500 ml灭菌水中，彻底溶解，测定pH应为7.0左右，不要调节pH。用前稀释10倍即配成1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。 2.2.1 CN-PAGE电泳： 阳极缓冲液和阴极缓冲液均直接使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液进行电泳。 2.2.2 BN-PAGE电泳： 阳极缓冲液使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液，阴极缓冲液按照下表配制：   1×蓝色阴极缓冲液   150 ml 10×BN/CN PAGE电泳缓冲液 15 ml 0.4% G-250 染料（电泳用） 0.75 ml 超纯水 定容至150 ml 2.3准备样品： 2.3.1 CN-PAGE电泳： 总体积 10 μl 蛋白样品 x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5 μl 超纯水 补至10 μl   不要加热 2.3.2 BN-PAGE电泳： 注：以下以植物类囊体膜蛋白电泳为例。 总体积 10 μl 10 μl   含去垢剂样品* 不含去垢剂样品 植物类囊体膜蛋白样品（DM复溶） x μl x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5 μl 2.5 μl 5% G-250染料（蛋白上样） 0.25-1 μl 0.1 μl（终浓度0.05%） 超纯水 补至10 μl 补至10 μl   不要加热 不要加热    * 含去垢剂样品中染料加入按照以下原则： 样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4。 例如样品中DDM终浓度为1%，则需要G-250终浓度为0.25%。10μl蛋白样品中需要加5%G-250染料0.5μl。 2.4电泳过程； 2.4.1 CN-PAGE电泳： 电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻拨出预制胶梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次，随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。 CN-PAGE电泳 恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 120V 10-15mA/板胶 4-10mA/板胶 50+min 注：冰浴电泳 2.4.2 BN-PAGE电泳： BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液；内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液，冰浴电泳，等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时，将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液，继续后续电泳，因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。 BN-PAGE电泳条件（一板胶） 恒电压 起始电流 电泳时间 缓冲液   120 V 8-15 mA 20-25 min 1×蓝色阴极缓冲液 冰浴电泳 指示前沿至凝胶三分之一处，更换内槽缓冲液为1×BN/CN 电泳缓冲液 恒电压 继续电泳时间 结束电流 缓冲液   120 V 45 min + 3-5 mA 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳 3. 转膜： BN-PAGE转膜必须用PVDF膜，不能用NC膜，因为NC膜与G-250结合非常紧密。 转膜缓冲液使用10×BN转膜缓冲液（货号：BC600P）。 4. 染色： 4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。 4.2 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。 4.3 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。 4.4 观察保存结果。 5. 实验示例：  BN-PAGE3-12% Precast Gel 恒压 120V 1.5 h 1×BN/CN电泳缓冲液冰浴电泳    BN-PAGE4-16% Precast Gel 恒压 120V 2 h 1×BN/CN电泳缓冲液冰浴电泳           RealPAGE Native BN/CN 预制胶 使用该产品发表部分文章列表： 1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editingfactor, required for normal fruit development in tomato plants Author: Jinyan Li, KeruWang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji,Liqun Ma,Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu,Daqi Fu,Yunbo Luo,Hongliang Zhu 植物材料：西红柿线粒体蛋白 Journal: New Phytologist (2023) 237:1188–1203 Institution： College of FoodScience and Nutritional Engineering, China Agricultural University Paper link： https://nph.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/nph.18594