ER-Tracker Green是一种具有细胞膜通透性的内质网(endoplasmic reticulum, ER)绿色荧光探针,对内质网具有高度选择性,可以用于活细胞内质网特异性荧光染色。
ER-Tracker Green为采用Molecular Probes公司的BODIPY® FL进行了荧光标记的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide,中文名称为格列本脲,是一种常用2型糖尿病的治疗药物,可以高度结合主要定位在内质网上的包含ATP敏感的钾离子通道(KATP channel)的磺脲类(sulphonylurea)受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。ER-Tracker Green适用于活细胞内质网的荧光染色,但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。使用本产品染色活细胞内质网的效果参考图1。
图1.ER-Tracker Green (内质网绿色荧光探针)对于NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)的染色效果。ER-Tracker Green染色的NRK-52E细胞其内质网呈现绿色荧光(图B),Mito-Tracker Red CMXRos (C1049B)染色的NRK-52E细胞其线粒体呈现红色荧光(图C),绿色荧光、红色荧光及细胞核蓝色荧光的叠加(merge)效果见图D。其中细胞核使用Hoechst 33342 (C1027)染色。本图仅作参考,实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异。
ER-Tracker Green的分子式为C37H42BClF2N6O6S,分子量为783.1。ER-Tracker Green呈绿色荧光,检测时最大激发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。ER-Tracker Green的化学结构式和激发、发射光谱图参考图2。
图2.ER-Tracker Green的化学结构式(A)和激发、发射光谱图(B)。
ER-Tracker Green对于细胞的毒性极低,而传统的DiOC6(3)对ER染色的同时也对细胞有一定的毒性。
本产品包装中提供了ER-Tracker Green稀释液,使ER-Tracker Green的使用更加便捷。
按照1:1000的比例稀释,每10µl可以配制10ml ER-Tracker Green工作液;按照1:3000的比例进行稀释,每10µl可以配制30ml ER-Tracker Green工作液。保存条件:-20℃避光保存,至少一年有效。注意事项:萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。可将检测试剂在不超过25℃的室温或20-25℃的水浴中融解并混匀后使用。本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为取得良好的使用效果,第一次解冻后可适当分装保存,但需注意分装的容器不能有ATP污染。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。使用说明中提供了检测ATP标准品的方法,实际检测细胞相对活力时通常并不需要检测ATP标准品。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
象形图 |
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